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CRISPR・Cas9エレクトロポレーション 以下の遺伝子編集を効率よく行うことができます。
・crRNA１つで単純欠損（インデル欠損を期待）
・crRNA２つで単純欠損（切った２箇所の間を抜く）
・ポイントミューティションの挿入（crRNA１つと40-60塩基のアームをつけた全長255塩基以下のドナーssODN）
・FLAGなどの短い配列の挿入（ポイントミューティションと同じ方法）
・Floxマウスの作製（ポイントミューティションと同じ方法を２回実施）
Floxマウス作製について 1回目のエレクトロポレーションで片側にloxPを挿入後、 loxPが入った雄マウスを使って体外受精を行い、得られた受精卵にエレクトロポレーションを行うことで狙った遺伝子の両側にloxPを挿入したFloxマウスを作製します。この方法はマウス作製までの時間はかかりますが、私達のところでは2021年6月までに4遺伝子座でFloxマウス作製の実績があります。一度に両方を入れる方法を何度がチャレンジしましたが、私達のところでは1回のエレクトロポレーションで２箇所のloxPを同時に入れてFloxマウスが得られた事は、今まで１回しかありませんでした。
〇方法 Cas9タンパク、ドナーssODN、
crRNA、tracrRNAあるいはsgRNAの入ったカクテルをマウス受精卵の前核にエレクトロポレーションで導入します。 およそ150個の受精卵にエレクトロポレーションを実施して、翌日2cellを5腹程度に移植します。生後3週間程度でマウスをお渡しします。
〇使用機材
型式：GEB15 と同社ディスポ電極を使用
〇電圧等 25Vプラスマイナス2回（3msec
ON + 97msec OFF）
〇参考文献 Hashimoto, M., Yamashita, Y.,
Takemoto, T. (2016).
エレクトロポレーション
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