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DNA　Injection

Tg作製（トランスジェニックマウス）

  ２００個以上のインジェクション済み受精卵を移植できるようDNAインジェクションを行います。C57BL/6を使った場合、一回のインジェクションでトランスジーン陽性個体が０〜 ６匹程度得られています。生まれたマウスは基本的には離乳前に仮親といっしょにお渡しします。
　ご希望に応じて胎生期の解析にもご利用いただけますのでご相談下さい。

スクリーニング

　マウスは離乳前後に、PCR、southern blottingおよびシーケンスなどにより、スクリーニングを行い、結果を支援チームまでご報告ください。変異マウスが得られなかった場合、要望に応じて再インジェクションをします。

系統

　C57BL/6とICRは、前核期胚を凍結保存してありますので、スケジュールに余裕があれば、DNAを受け取った当日にインジェクションをする事も可能です。 系統として確立済みのトランスジェニックマウスやノックアウトマウスで体外受精を行い、得られた前核期胚でのDNAインジェクションも行います。

 

実績（クリックで表を表示）

DNAの調製（Tg)

　チューブにDNA名（依頼書に記載したTransgene Name）と濃度、調製日を明記の上、濃度調製後の電気泳動写真を添付して送付して下さい。注入用DNA溶液の純度は作製成績に大きく影響しますので、精製にあたってはアガロースゲル等の夾雑物の混入がないように十分注意して下さい。

Standard-sized DNA（〜10ｋｂ程度）の場合

  • DNAの形状：線状DNAとし、ベクター配列部分を除いて下さい（文献１）。
    　
  • ゲルからの精製：一般にTg作製に用いられる方法で精製して下さい。
    市販の精製キット（QIAGEN QiaQuickやQiaEXII kitsなど）の使用も可能です。
  • DNA濃度：30〜200nｇ/μｌ程度 in TEに調製して下さい。
    当方にて１〜５ng/μlになるようPBS(-)(pH7.4)で希釈して使用します。
  • DNA量
    ・濃度50ng/ul前後の時は40ul以上
    ・濃度100ng/ul前後の時は20ul以上
    ・濃度200ng/ul前後の時は10ul以上
    で、可能であればロットの異なるものを２本ご用意下さい。

BAC DNAの場合

　マイクロインジェクションに用いるDNAの形状は環状でも線状でも構いません。精製法やModificationに関しては文献２〜３をご参考下さい。市販の精製キットも使用可能です。DNA濃度や量は上記と同様に調製して下さい。

　

＊調製方法についてはこちらのサイトもご参考下さい。

京都大学白眉プロジェクト　今吉格博士のHP

・コンベショナルTgマウスのインジェクション用DNAの調製法

・BAC Tgマウスのインジェクション用DNAの調製法

　

依頼書

Ｔｇ依頼書（クリックでワードファイルをダウンロード）

文献/参考書等

  1. Brinster RL, Chen HY, Trumbauer ME, Yagle MK, Palmiter RD.
    Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs.
    Proc. Nail. Acad. Sci. USA 82 4438-4442, July (1985)
  2. Yang XW, Model P, Heintz N.
    Homologous recombination based modification in Esherichia coli and germline transmission in transgenic mice of a bacterial artificial chromsome
    Nature biotechnology 15 859-865 (1997)
  3. Gong S, Zheng C, Doughty ML, Losos K, Didkovsky N, Schambra UB, Nowak NJ, Joyner A, Leblanc G, Hatten ME, Heintz N.
    A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes
    Nature. 425 917-925. (2003)
  4. 発生工学実験マニュアル. トランスジェニックマウスの作り方
    　勝木元也／編　講談社サイエンティフィク
  5. Manipulating the Mouse Embryo. A Laboratory Manual. 3rd Edition.
    　Nagy A, Gertsenstein M, Vintersten K and Behringer R.
    　Cold Spring Harbor Laboratory Press,2003.
  6. 理化学研究所 BDR生体モデル開発チーム
    　（ https://www.bdr.riken.jp/jp/research/labs/kiyonari-h/index.html）