FAQよくある質問

よくある質問

Ｔｇ：1.DNAの調製方法
　　 2.Ｔｇマウスの作製実績.

KO：1.細胞の調製
 2.毛色キメラマウスの作製実績

IVF：1.雄の用意
 2.凍結保存の実績

その他:1.依頼書
　　　　　 2.支払い方法
　　　　　 3.使用機材

Ｔｇ（トランスジェニックマウス）

DNAの調製方法
チューブにDNA名（依頼書に記載したTransgene Name）と濃度、調製日を明記の上、濃度調製後の電気泳動写真を添付して送付して下さい。注入用DNA溶液の純度は作製成績に大きく影響しますので、精製にあたってはアガロースゲル等の夾雑物の混入がないように十分注意して下さい。
Standard-sized DNA（～10ｋｂ程度）の場合
- DNAの形状：線状DNAとし、ベクター配列部分を除いて下さい（文献１）。
  　
- ゲルからの精製：一般にTg作製に用いられる方法で精製して下さい。
  市販の精製キット（QIAGEN QiaQuickやQiaEXII kitsなど）の使用も可能です。
- DNA濃度：30～200nｇ/μｌ程度 in TEに調製して下さい。
  当方にて１～５ng/μlになるようPBS(-)(pH7.4)で希釈して使用します。
- DNA量
  ・濃度50ng/ul前後の時は40ul以上
  
  ・濃度100ng/ul前後の時は20ul以上
  
  ・濃度200ng/ul前後の時は10ul以上
  で、可能であればロットの異なるものを２本ご用意下さい。
BAC DNAの場合

　マイクロインジェクションに用いるDNAの形状は環状でも線状でも構いません。精製法やModificationに関しては文献２～３をご参考下さい。市販の精製キットも使用可能です。DNA濃度や量は上記と同様に調製して下さい。

　

＊調製方法についてはこちらのサイトもご参考下さい。

京都大学白眉プロジェクト　今吉格博士のHP

・コンベショナルTgマウスのインジェクション用DNAの調製法

・BAC Tgマウスのインジェクション用DNAの調製法

　
Ｔｇマウスの作製実績.（別表を表示）

　　　　先頭に戻る

KO（ノックアウトマウス用キメラマウス）

ES細胞の調製
ES細胞の状態はキメラの作出効率に大きく影響します。対数増殖期にある細胞をトリプシン処理し、細胞１つ１つがバラバラになった状態で培養液に懸濁して下さい。具体的には 60mmデッシュ以上の容器でサブコンフルエントの状態のES細胞にトリプシン処理を行います。ES培地でトリプシン処理を止めて回収しゼラチンコートをしたデッシュに播種します。３０分培養後に回収して遠心管にいれ氷にのせて持参して下さい。トリプシン処理後の３０分培養はフィーダー細胞を取り除くためとトリプシン処理で弱ったES細胞を回復させる意味があります。６ウエルのデッシュから回収したES細胞でもインジェクションは可能ですが出来れば60mmデッシュ以上でES細胞数が多い状態をお願いします。フィーダー細胞と比較してＥＳ細胞数が少ないとインジェクション出来ません。キメラを得るために良い状態のES細胞をお願いします。
　
毛色キメラマウスの作製実績（別表を表示）

　　　　先頭に戻る

IVF

雄の用意
オスマウスは１２週齢以上、５２週齢以下で、交配に使用している場合は、１匹飼いにして２週間以上経過したものを２匹程度ご用意下さい。医生物学研究所４号館ＳＰＦマウス飼育室利用者はＩＶＦの前日までにオスマウスの置き場所をこちらまでご連絡下さい。
他の飼育施設を利用している場合は、ＩＶＦ当日の朝８時３０分から９時までの間に、オスの処置を行いお渡ししたチューブに精巣、精巣上体および脂肪の一塊を採取してご持参下さい。
　
凍結保存の実績（別表を表示）

　　　　先頭に戻る

その他

依頼書（クリックでワードファイルをダウンロード）
Ｔｇ依頼書
 ＫＯ依頼書
 体外受精依頼書
　
支払い方法
毎年６月前後と１２月前後に清算を行います。予算の振り替えで支払いをお願いしております。他部局の場合は相談に応じます。

　
使用機材
インジェクション、ホールディングピペット作製：サッター社製P-97 IVF、NARISHIGE MF-900 MICRO FOGEを使用しています。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　インジェクションのシステム：ライカの機械式とナリシゲのシステムを使用しています。

　　　　先頭に戻る